Code Authors: Mark E. Pepin, MD, PhD, MS
Contact: pepinme@gmail.com
Institution: Brigham and Women’s Hospital | Broad
Institute of Harvard and MIT
Location: Boston, MA
library(Seurat)
# Upload data provided
hdat <- readRDS(file = "../1_Input/snRNA_Human_ControlDissection_integrated_seurat_v2.rds")
# Initialize the Seurat object with the raw (non-normalized data).
hdat[["percent.mt"]] <- PercentageFeatureSet(hdat, pattern = "^MT-")
hdat <- subset(hdat, subset = nFeature_RNA > 200 & nFeature_RNA < 2500 & percent.mt < 5)
hdat <- NormalizeData(hdat, normalization.method = "LogNormalize", scale.factor = 10000)
hdat <- FindVariableFeatures(hdat, selection.method = "vst", nfeatures = 10000)
all.genes <- rownames(hdat)
hdat <- ScaleData(hdat, features = all.genes)
hdat[["Celltype_annotation_v2"]]$Celltype_annotation_v2 <- factor(hdat[["Celltype_annotation_v2"]]$Celltype_annotation_v2, c("VSMC1", "VSMC2", "Myofibroblast", "Fibroblast1", "Fibroblast2", "EC1", "EC2", "Macrophage", "NKT Cells", "Neuronal"))
##
TAA_list<-SplitObject(hdat, split.by = "Disease") # split dataset into a list of two seruat objects
# normalize and identify variable features for each dataset independently
TAA.list <- lapply(X = TAA_list, FUN = function(x) {
x <- NormalizeData(x)
x <- FindVariableFeatures(x, selection.method = "vst", nfeatures = 10000)
})
# select features that are repeatedly variable across datasets for integration
features <- SelectIntegrationFeatures(object.list = TAA.list)
# Preserve cell type markers in the anchoring dataset
VSMC1_genes<-c("PKD1", "COL6A2", "PDLIM7", "FLNA", "SMTN")
VSMC2_genes<-c("MYH11", "ACTA2", "ITGA8", "PRKG1", "CRISPLD1")
Fibroblast1_genes<-c("ABCA10", "C3", "ADGRD1", "FBLN1", "DCN")
Fibroblast2_genes<-c( "NFASC", "SAMD5","UACA","PRSS23") # "TEX41",
Fibromyocyte_genes<-c("DGKG", "ADAMTS1", "RGS6", "TNC", "GRIP2", "ANGPT2")
EC1_genes<-c("DIPK2B", "ARHGEF15", "STC1", "FLT1") #, "NOTCH4"
EC2_genes<-c("VWF", "BMPER", "BMX", "NOS1")
NKT_genes<-c("SKAP1", "RIPOR2", "RBPJ", "FYN", "ITGAL", "CD96")
Macrophage_genes<-c("MRC1", "LGMN", "F13A1", "RBM47")
Dendritic_genes<-c("ITGAX", "S100A9", "CSF3R", "CXCL8")
features<-union(features, union(VSMC1_genes,VSMC2_genes))
# VSMC1_genes, union(
# VSMC2_genes, union(
# Fibroblast1_genes, union(
# Fibroblast2_genes, union(
# Fibromyocyte_genes, union(
# EC1_genes, union(
# EC2_genes, union(
# NKT_genes, union(Macrophage_genes, Dendritic_genes)
# )
# )
# )
# )
# )
# )
# )
# )
# )
# Identify "anchors" (cells that are unchanged across datasets)
TAA.anchors <- FindIntegrationAnchors(object.list = TAA.list, anchor.features = features)
# this command creates an 'integrated' data assay
TAA.combined <- IntegrateData(anchorset = TAA.anchors)
# Specify the matrix used in the downstream analysis
DefaultAssay(TAA.combined) <- "integrated"
# Run the standard workflow for visualization and clustering
TAA.combined <- ScaleData(TAA.combined, verbose = FALSE)
TAA.combined <- RunPCA(TAA.combined, npcs = 30, verbose = FALSE)
TAA.combined <- RunUMAP(TAA.combined, dims = 1:30)
TAA.combined <- RunTSNE(TAA.combined)
TAA.combined <- FindNeighbors(TAA.combined, dims = 1:30)
TAA.combined <- FindClusters(TAA.combined, resolution = 0.4)
## Modularity Optimizer version 1.3.0 by Ludo Waltman and Nees Jan van Eck
##
## Number of nodes: 9278
## Number of edges: 381125
##
## Running Louvain algorithm...
## Maximum modularity in 10 random starts: 0.8951
## Number of communities: 11
## Elapsed time: 0 seconds
saveRDS(TAA.combined, file = "TAA_FFPE_snRNA.rds")
#
plot1 <- VariableFeaturePlot(hdat)
top10 <- head(VariableFeatures(hdat), 10)
plot2 <- LabelPoints(plot = plot1, points = c(top10), repel = TRUE)
pdf(file = "../2_Output/Figure_1/FFPE_Variable_genes.pdf")
plot2
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Clustering
umap_disease <- DimPlot(hdat, reduction = "umap", group.by = "Disease")
umap_clusters <- DimPlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = TRUE, repel = TRUE)
pca_disease <- DimPlot(TAA.combined, reduction = "pca", group.by = "Disease")
pca_clusters <- DimPlot(TAA.combined, reduction = "pca", label = TRUE, repel = TRUE)
tsne_disease <- DimPlot(TAA.combined, reduction = "tsne", group.by = "Disease")
tsne_clusters <- DimPlot(TAA.combined, reduction = "tsne", label = TRUE, repel = TRUE)
pdf("../2_Output/Supplemental_Figures/Clustering_Comparison.pdf", width = 11, height = 8)
umap_disease+pca_disease+tsne_disease+umap_clusters+pca_clusters+tsne_clusters
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Add tracings around the points
library(ggplot2)
library(ggtrace)
library(ggthemes)
library(ggrepel)
library(dplyr)
# UMAP
umap_data <- as.data.frame(TAA.combined@reductions$umap@cell.embeddings) # Create a data.frame from the UMAP (to be used in ggplot)
# Disease Clustering
umap_data$Disease <- TAA.combined$Disease
umap_data$Disease <- factor(umap_data$Disease, levels = c("Control", "Dissection"))
umap_disease <- ggplot(umap_data, aes(x = UMAP_1, y = UMAP_2, fill = Disease)) +
geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme_classic() +
theme(text = element_text(size = 14))
umap_disease
### UMAP Clustering
umap_data$Cluster <- TAA.combined$seurat_clusters # Create a variable based on UMAP clusters (Seurat)
cluster_centers <- aggregate(cbind(UMAP_1, UMAP_2) ~ Cluster, umap_data, mean) # Label Clusters
umap_clusters <- ggplot(umap_data, aes(x = UMAP_1, y = UMAP_2, fill = Cluster)) +
geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme_classic() +
geom_text_repel(data = cluster_centers, aes(label = Cluster), size = 6) +
theme(legend.position = "none", text = element_text(size = 14))
umap_clusters
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/UMAP_overlay.pdf", width = 11.5, height = 5, bg = "transparent")
umap_disease + umap_clusters
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
#Figure 1C - Proportional Graph
library(dittoSeq)
dittoBarPlot(
object = hdat,
var = "Celltype_annotation_v2",
group.by = "Disease")
dittoBarPlot(
object = hdat,
var = "Celltype_annotation_v2",
group.by = "Sample_name",
split.by = "Disease")
######################################################
############## Dimensionality
#####################################################
# to control for any confounders, we can add the 'vars.to.regress' parameter, including any variable in the metadata <- ScaleData(pbmc, vars.to.regress = "percent.mt")
TAA.combined <- RunPCA(TAA.combined, features = VariableFeatures(object = TAA.combined))
# Visualize the features/genes
VizDimLoadings(TAA.combined, dims = 1:5, reduction = "pca")
DimPlot(TAA.combined, reduction = "umap")
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/PC_Heatmaps.pdf")
DimHeatmap(TAA.combined, dims = 1:15, cells = 500, balanced = TRUE)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Determine the number of dimensions represented by the data
TAA.combined <- JackStraw(TAA.combined, num.replicate = 100)
TAA.combined <- ScoreJackStraw(TAA.combined, dims = 1:20)
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/JackStraw.pdf")
JackStrawPlot(TAA.combined, dims = 1:20)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/ElbowPlot.pdf")
ElbowPlot(TAA.combined)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
######################################################
############## Cluster Annotation
#####################################################
library(ggplot2)
library(dplyr)
library(Seurat)
# TAA.combined<-readRDS(file = "TAA.ALL_snRNA.rds") # contains ACTA2, normal, and aortic aneurism (Cheu et. al)
# Find all gene markers
DEGs_Clusters<-FindAllMarkers(TAA.combined, assay = "RNA")
write.csv(DEGs_Clusters, "../2_Output/Supplemental_Figures/DEGs_Clusters.csv")
#Identify Clusters corresponding with known gene markers:
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/UMAP_split.pdf", height = 4, width = 7)
DimPlot(TAA.combined, label = T, split.by = "Disease") + NoLegend()
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/UMAP_samples.pdf", height = 4, width = 11)
DimPlot(TAA.combined, label = T, split.by = "Sample_name") + NoLegend()
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Create a dot-bplot of the top 5 markers for each
library(scCustomize)
paletteLength <- 100
myColor <- colorRampPalette(c("dodgerblue4", "white", "coral2"))(paletteLength)
top5_markers <- Extract_Top_Markers(marker_dataframe = DEGs_Clusters, num_genes = 10, named_vector = FALSE,
make_unique = TRUE)
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/Dot.plot_top5markers.pdf", height = 10, width = 7)
Clustered_DotPlot(seurat_object = TAA.combined, features = top5_markers, k = 10, colors_use_exp = myColor)
## [[1]]
##
## [[2]]
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
saveRDS(TAA.combined, file = "TAA_FFPE_snRNA.rds")
library(Seurat)
library(ggrepel)
TAA.combined<-readRDS(file = "TAA_FFPE_snRNA.rds")
#Identify Clusters corresponding with known gene markers:
VSMC1_genes<-c("PKD1", "COL6A2", "PDLIM7", "FLNA", "SMTN")
VSMC2_genes<-c("MYH11", "ACTA2", "ITGA8", "PRKG1", "CRISPLD1")
Fibroblast1_genes<-c("ABCA10", "C3", "ADGRD1", "FBLN1", "DCN")
Fibroblast2_genes<-c("NFASC", "SAMD5", "PRSS23") #"UACA","TEX41",
Fibromyocyte_genes<-c("ADAMTS1", "RGS6", "TNC") # , "ANGPT2", "DGKG", "GRIP2"
EC1_genes<-c("DIPK2B", "ARHGEF15", "STC1", "FLT1") # , "NOTCH4"
EC2_genes<-c("VWF", "BMPER", "BMX", "NOS1")
NKT_genes<-c("SKAP1", "RIPOR2", "ITGAL", "CD96") # "RBPJ", "FYN",
Macrophage_genes<-c("MRC1", "LGMN", "F13A1", "RBM47") #
Dendritic_genes<-c("ITGAX", "S100A9", "CSF3R", "CXCL8") #
# Plot density function
library(Nebulosa)
VSMC1_density<-plot_density(TAA.combined, VSMC1_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
VSMC2_density<-plot_density(TAA.combined, VSMC2_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
Fibroblast1_density<-plot_density(TAA.combined, Fibroblast1_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
Fibroblast2_density<-plot_density(TAA.combined, Fibroblast2_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
Fibromyocyte_density<-plot_density(TAA.combined, Fibromyocyte_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
EC1_density<-plot_density(TAA.combined, EC1_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
EC2_density<-plot_density(TAA.combined, EC2_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
Macrophage_density<-plot_density(TAA.combined, Macrophage_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
NKT_density<-plot_density(TAA.combined, NKT_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/Density_plots.pdf")
VSMC1_density
## $PKD1
##
## $COL6A2
##
## $PDLIM7
##
## $FLNA
##
## $SMTN
##
## $`PKD1+ COL6A2+ PDLIM7+ FLNA+ SMTN+`
VSMC2_density
## $MYH11
##
## $ACTA2
##
## $ITGA8
##
## $PRKG1
##
## $CRISPLD1
##
## $`MYH11+ ACTA2+ ITGA8+ PRKG1+ CRISPLD1+`
Fibroblast1_density
## $ABCA10
##
## $C3
##
## $ADGRD1
##
## $FBLN1
##
## $DCN
##
## $`ABCA10+ C3+ ADGRD1+ FBLN1+ DCN+`
Fibroblast2_density
## $NFASC
##
## $SAMD5
##
## $PRSS23
##
## $`NFASC+ SAMD5+ PRSS23+`
EC1_density
## $DIPK2B
##
## $ARHGEF15
##
## $STC1
##
## $FLT1
##
## $`DIPK2B+ ARHGEF15+ STC1+ FLT1+`
EC2_density
## $VWF
##
## $BMPER
##
## $BMX
##
## $NOS1
##
## $`VWF+ BMPER+ BMX+ NOS1+`
Macrophage_density
## $MRC1
##
## $LGMN
##
## $F13A1
##
## $RBM47
##
## $`MRC1+ LGMN+ F13A1+ RBM47+`
NKT_density
## $SKAP1
##
## $RIPOR2
##
## $ITGAL
##
## $CD96
##
## $`SKAP1+ RIPOR2+ ITGAL+ CD96+`
Fibromyocyte_density
## $ADAMTS1
##
## $RGS6
##
## $TNC
##
## $`ADAMTS1+ RGS6+ TNC+`
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Overlay these gene markers onto the UMAP to identify clusters
pdf(file = "../2_Output/CellType_FeaturePlots.pdf")
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = Fibroblast1_genes)
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = Fibroblast2_genes)
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = EC1_genes)
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = EC2_genes)
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = NKT_genes)
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = Macrophage_genes)
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = VSMC1_genes)
FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = VSMC2_genes)
# FeaturePlot(TAA.combined, reduction = "umap", label = T, features = Dendritic_genes)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
#Create a figure of cell-type specific markers overlying the UMAP
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/CellType_Differentiation.pdf")
plot_density(TAA.combined, c("ACTA2", "FBLN1", "F13A1", "VWF", "STC1", "NFASC", "ITGAL", "ITGAX"), reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
## $ACTA2
##
## $FBLN1
##
## $F13A1
##
## $VWF
##
## $STC1
##
## $NFASC
##
## $ITGAL
##
## $ITGAX
##
## $`ACTA2+ FBLN1+ F13A1+ VWF+ STC1+ NFASC+ ITGAL+ ITGAX+`
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Change the identity of the clusters to cell types
Idents(TAA.combined) <- "Celltype_annotation_v2"
# Create UMAP with annotated cell-types
UMAP_CellTypes<-DimPlot(TAA.combined, label = T) + NoLegend()
UMAP_CellTypes
#######
umap_data <- as.data.frame(TAA.combined@reductions$umap@cell.embeddings) # Create a data.frame from the
umap_data$CellType<-TAA.combined@active.ident
cluster_centers <- aggregate(cbind(UMAP_1, UMAP_2) ~ CellType, umap_data, mean) # Label Clusters
umap_celltype <- ggplot(umap_data, aes(x = UMAP_1, y = UMAP_2, fill = CellType)) +
# geom_point() +
# scale_fill_brewer(palette="Set2") +
geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme_classic() +
geom_text_repel(data = cluster_centers, aes(label = CellType), size = 5) +
theme(legend.position = "none", text = element_text(size = 12))
## Fully Annotated Merged UMAP
pdf(file = "../2_Output/UMAP_Disease.Overlay.pdf", height = 5, width = 5)
umap_celltype
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
pdf(file = "../2_Output/Supplemental_Figures/UMAP_All.three_Labelled.pdf", height = 8, width = 16)
umap_disease+theme(legend.position = "topright", text = element_text(size = 14)) +
umap_clusters+umap_celltype
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
## Use ridgeplots to identify bimodal gene marker distributions (enriched clusters)
pdf(file = "../2_Output/Celltype_RidgePlots.pdf", height = 10, width = 15)
RidgePlot(TAA.combined,features = Fibroblast1_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = Fibroblast2_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = EC1_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = EC2_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = NKT_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = Macrophage_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = VSMC1_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = VSMC2_genes, ncol = 2)
RidgePlot(TAA.combined, features = Dendritic_genes, ncol = 2)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Differential Expression
# Export DEGs using cell-type clusters
DEGs_CellTypes<-FindAllMarkers(TAA.combined)
write.csv(DEGs_CellTypes, "../2_Output/DEGs_Clusters.csv")
# Create a dot-bplot of the top 5 markers for each
library(scCustomize)
paletteLength <- 100
myColor <- colorRampPalette(c("dodgerblue4", "white", "coral2"))(paletteLength)
top5_markers <- Extract_Top_Markers(marker_dataframe = DEGs_CellTypes, num_genes = 5, named_vector = FALSE,
make_unique = TRUE)
pdf(file = "../2_Output/Dot.plot_top5markers.pdf", height = 10, width = 7)
Clustered_DotPlot(seurat_object = TAA.combined, features = top5_markers, k = 10, colors_use_exp = myColor)
## [[1]]
##
## [[2]]
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Heatmap of Clusters
DEGs_CellTypes %>%
group_by(cluster) %>%
top_n(n = 10, wt = avg_log2FC) -> top10
pdf(file = "../2_Output/Celltype_Heatmap.pdf", height = 10, width = 15)
DoHeatmap(TAA.combined, features = top10$gene, size = 3, disp.min = -2, disp.max = 2) + scale_fill_gradientn(colors = c("dodgerblue4", "white", "coral2")) + labs(title = "Heatmap of Top-10 most variable genes within each cluster")
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Probability distribution of specific genes across all clusters/cell types
VlnPlot(TAA.combined, features = c("VWF", "HDAC9", "ACTA2"))
#
DotPlot(TAA.combined, features = c(VSMC1_genes, VSMC2_genes, EC1_genes, EC2_genes, Fibroblast1_genes, Fibroblast2_genes, Fibromyocyte_genes, Macrophage_genes, NKT_genes)) + RotatedAxis()
saveRDS(TAA.combined, file = "TAA_FFPE_snRNA.rds")
library(Seurat)
library(dplyr)
library(ggtrace)
library(ggplot2)
library(ggrepel)
# Add tracings around the points
library(ggplot2)
library(ggtrace)
library(ggthemes)
library(ggrepel)
library(dplyr)
hdat_vsmc <- subset(TAA.combined, Celltype_annotation_v2==c("VSMC1", "VSMC2"))
UMAP_VSMC<-DimPlot(hdat_vsmc, label = T) + NoLegend()
# Figure 1A - UMAP of VSMCs only
pdf("../2_Output/Figure_2/Fig2A_UMAP_VSMC.pdf", height = 3.5, width = 3.5)
UMAP_VSMC
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
library(Nebulosa)
VSMC1_density<-plot_density(hdat_vsmc, VSMC1_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
VSMC2_density<-plot_density(hdat_vsmc, VSMC2_genes, reduction = "umap", joint = TRUE, combine = FALSE, pal = "magma")
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/Fig2A_VSMC_Density_plots.pdf", height = 3.5, width = 3.5)
VSMC1_density
## $PKD1
##
## $COL6A2
##
## $PDLIM7
##
## $FLNA
##
## $SMTN
##
## $`PKD1+ COL6A2+ PDLIM7+ FLNA+ SMTN+`
VSMC2_density
## $MYH11
##
## $ACTA2
##
## $ITGA8
##
## $PRKG1
##
## $CRISPLD1
##
## $`MYH11+ ACTA2+ ITGA8+ PRKG1+ CRISPLD1+`
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Visualization
p1 <- DimPlot(hdat_vsmc, reduction = "umap", group.by = "Disease")
p2 <- DimPlot(hdat_vsmc, reduction = "umap", label = TRUE, repel = TRUE)
p1 + p2
umap_data <- as.data.frame(hdat_vsmc@reductions$umap@cell.embeddings) # Create a data.frame from the UMAP (to be used in ggplot)
# Disease Clustering
umap_data$Disease <- hdat_vsmc$Disease
umap_data$Disease <- factor(umap_data$Disease, levels = c("Control", "Dissection"))
p1 <- ggplot(umap_data, aes(x = UMAP_1, y = UMAP_2, fill = Disease)) +
geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme_classic() +
theme(text = element_text(size = 14))
p1
umap_TAA<-umap_data %>% filter(Disease=="Control")
p_TAA <- ggplot(umap_TAA, aes(x = UMAP_1, y = UMAP_2, fill = Disease)) +
geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme_classic() +
theme(text = element_text(size = 14))
p_TAA
umap_ACTA<-umap_data %>% filter(Disease=="Dissection")
p_ACTA <- ggplot(umap_ACTA, aes(x = UMAP_1, y = UMAP_2, fill = Disease)) +
geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme_classic() +
theme(text = element_text(size = 14))
p1 + p_TAA + p_ACTA
# Create the UMAP of cell-type specific clusters
UMAP_CellTypes<-DimPlot(hdat_vsmc, label = T) + NoLegend()
UMAP_CellTypes
umap_data <- as.data.frame(hdat_vsmc@reductions$umap@cell.embeddings) # Create a data.frame from the
umap_data$Cluster<-hdat_vsmc@active.ident
cluster_centers <- aggregate(cbind(UMAP_1, UMAP_2) ~ Cluster, umap_data, mean) # Label Clusters
p3 <- ggplot(umap_data, aes(x = UMAP_1, y = UMAP_2, fill = Cluster)) +
# geom_point() +
# scale_fill_brewer(palette="Set2") +
geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme_classic() +
geom_text_repel(data = cluster_centers, aes(label = Cluster), size = 6) +
theme(legend.position = "none", text = element_text(size = 14))
p3
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/VSMC_UMAP_CellTypes.pdf", width = 11.5, height = 5, bg = "transparent")
p1+theme(legend.position = "top", text = element_text(size = 14)) + p3
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Differential Expression between VSMCs
VSMC1.markers <- FindMarkers(hdat_vsmc, ident.1 = "VSMC1", min.pct = 0.25, logfc.threshold = 0.25)
VSMC2.markers <- FindMarkers(hdat_vsmc, ident.1 = "VSMC2", min.pct = 0.25, logfc.threshold = 0.25)
#Volcano Plot
# Load packages
library(dplyr)
library(ggplot2)
library(ggrepel)
library(openxlsx)
# Read data from the web
options(ggrepel.max.overlaps = Inf)
results = mutate(VSMC2.markers, minuslogpvalue = -log(p_val), log2FC=avg_log2FC)
results<-results %>% filter(p_val!=0)
results$gene_name<-rownames(results)
results <- results %>%
mutate(., sig=ifelse(p_val<0.05 & log2FC>.5,
"P < 0.05 and Fold-Change > 0.5",
ifelse(p_val<0.05 & log2FC< 0-0.5,
"P < 0.05 and Fold-Change < -0.5",
"Not Sig")
)
)
results$sig<-factor(results$sig,
levels = c("P < 0.05 and Fold-Change < -0.5",
"Not Sig",
"P < 0.05 and Fold-Change > 0.5")
)
max(results$minuslogpvalue, na.rm = TRUE)
## [1] 376.5639
max(results$log2FC, na.rm = TRUE)
## [1] 2.104613
min(results$log2FC, na.rm = TRUE)
## [1] -2.133374
p = ggplot(results, aes(log2FC, minuslogpvalue)) +
theme_classic() +
theme(axis.line = element_blank(),
axis.ticks = element_blank()
) +
geom_point(aes(fill=sig, size = minuslogpvalue),
colour="black",
shape=21,
stroke = 0,
alpha = .9) +
geom_vline(xintercept=0.5, size=.5, linetype="dashed") +
geom_vline(xintercept=-0.5, size=0.5, linetype="dashed") +
geom_hline(yintercept=0-log(0.05), size=.5, linetype="dashed") +
labs(x=expression(Log[2](Fold-Change)), y=expression(-Log[10](P-value))) +
xlim(min(results$log2FC, na.rm = TRUE),max(results$log2FC, na.rm = TRUE)) +
ylim(0, max(results$minuslogpvalue, na.rm = TRUE)) + geom_hline(yintercept = 0, size = 1) +
geom_vline(xintercept=0, size=1) +
scale_fill_manual(values=c("darkcyan", "darkgray", "coral2")) +
scale_size_continuous(range = c(.1, 3))
p+
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC< -0.5), 10, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC>0.5), 10, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
theme(text = element_text(size=20))
##
pdf(file = paste0("../2_Output/Figure_2/VSMC_1.vs.2_VolcanoPlot.pdf"), height = 5, width = 5)
p+
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC< -0.5), 10, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC>0.5), 10, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
theme(text = element_text(size=14), legend.position="none")
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Create a file of differentially expressed genes between VSMC1 and VSMC2
openxlsx::write.xlsx(VSMC1.markers, file = "../2_Output/Figure_2/VSMC_1v2_DEGs.xlsx", rowNames=T)
VSMC_type_DEs <- results$gene_name[1:100]
##
plots_VSMC2 <- VlnPlot(hdat_vsmc, features = c("PALLD", "MAP2", "PRKG1"), group.by = "Celltype_annotation_v2",
pt.size = 0) & theme(legend.position = 'none', axis.title.x = element_blank())
plots_VSMC1 <- VlnPlot(hdat_vsmc, features = c("B2M", "TNFAIP2", "STAB1"), group.by = "Celltype_annotation_v2",
pt.size = 0) & theme(legend.position = 'none', axis.title.x = element_blank())
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/VSMC2_Top.Violins.pdf", height = 3, width = 6)
plots_VSMC2
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/VSMC1_Top.Violins.pdf", height = 3, width = 6)
plots_VSMC1
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
##################
DoHeatmap(hdat_vsmc, features = VSMC_type_DEs, group.by = "Celltype_annotation_v2",size = 3, disp.min = -2, disp.max = 2) + scale_fill_gradient2(low = "dodgerblue4", mid = "white", high = "coral2",midpoint = 0)
##################
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/DotPlot_VSMC_1.v.2.pdf", height = 10, width = 5)
Clustered_DotPlot(seurat_object = hdat_vsmc, features = VSMC_type_DEs, group.by = "Celltype_annotation_v2", x_lab_rotate=F, k = 2)
## [[1]]
##
## [[2]]
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
library(monocle3)
library(Seurat)
library(SeuratWrappers)
library(dplyr)
library(ggtrace)
Merged_scaled<-hdat_vsmc
Merged_scaled@active.assay = "RNA"
cds<-SeuratWrappers::as.cell_data_set(Merged_scaled)
cds <- preprocess_cds(cds, num_dim = 100)
cds <- estimate_size_factors(cds)
# Include gene names (not done by default by the seurat conversion)
rowData(cds)$gene_name <- rownames(cds)
rowData(cds)$gene_short_name <- rowData(cds)$gene_name
# Run Monocle
cds <- cluster_cells(cds) # This step creates "partitions" that are used in the trajectory inference
plot_cells(cds, show_trajectory_graph = FALSE, color_cells_by = "partition") # this shows the partitions overlain on the UMAP
cds <- learn_graph(cds, use_partition = TRUE) # creating trajectory inference within each partition
##
|
| | 0%
|
|======================================================================| 100%
# cds <- order_cells(cds) # Used when setting the nodes; if already known, use the next line
root_cell <- "TACTCGCTCCCTGACT-1-1" # names(which(cds@principal_graph_aux$UMAP$pseudotime==0))
cds<-order_cells(cds, root_cells = root_cell)
# Plot the pseudotime on UMAP
plot_cells(cds,
color_cells_by = "pseudotime",
label_branch_points = FALSE,
label_leaves = FALSE)
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/VSMC_UMAP_Trajectory_Partition.pdf", height = 3, width = 3)
plot_cells(cds,
color_cells_by = "partition",
graph_label_size = 1,
cell_size = .5,
label_roots = F,
label_branch_points = FALSE,
label_leaves = FALSE)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/VSMC_UMAP_Trajectory_Pseudotime.pdf", height = 3, width = 4)
plot_cells(cds,
color_cells_by = "pseudotime",
graph_label_size = 1,
cell_size = .7,
label_branch_points = FALSE,
label_leaves = F)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Identify pseudotime
modulated_genes <- graph_test(cds, neighbor_graph="principal_graph", cores=8) # Identify differentially-expressed genes with pseudotime
##
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| | 0%, ETA 03:00
| | 0%, ETA 00:33
| | 0%, ETA 00:26
| | 0%, ETA 00:24
| | 0%, ETA 00:20
| | 0%, ETA 00:17
| | 0%, ETA 00:16
| | 0%, ETA 00:14
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| | 0%, ETA 00:10
| | 0%, ETA 00:10
| | 0%, ETA 00:10
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| | 1%, ETA 00:10
| | 1%, ETA 00:10
| | 1%, ETA 00:09
| | 1%, ETA 00:09
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| | 1%, ETA 00:09
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| | 1%, ETA 00:09
| | 1%, ETA 00:09
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|== | 3%, ETA 00:08
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modulated_genes <- na.omit(modulated_genes) # remove NA's
modulated_genes <- modulated_genes[modulated_genes$q_value < 0.05 & modulated_genes$status =="OK", ] # filter cds results down
modulated_genes <- modulated_genes[order(-modulated_genes$morans_test_statistic), ] # order by moran's test
#### Create a heatmap of genes with similar pseudotime kinetics
genes <- row.names(subset(modulated_genes, q_value < 0.05 & morans_I > 0.2))
openxlsx::write.xlsx(modulated_genes, "../2_Output/Figure_2/Pseudotime_DEGs.xlsx")
library(ComplexHeatmap)
library(ggplot2)
library(dplyr)
library(RColorBrewer)
library(circlize)
library(monocle3)
pt.matrix <- exprs(cds)[match(genes,rownames(rowData(cds))),order(pseudotime(cds))]
#Can also use "normalized_counts" instead of "exprs" to use various normalization methods, for example:
#normalized_counts(cds, norm_method = "log")
pt.matrix <- t(apply(pt.matrix,1,function(x){smooth.spline(x,df=3)$y})) # Create a spline that smooths the pseudotime-based expression along the first 3 degrees of freedom.
pt.matrix <- t(apply(pt.matrix,1,function(x){(x-mean(x))/sd(x)}))
rownames(pt.matrix) <- genes;
#Ward.D2 Hierarchical Clustering
hthc <- Heatmap(
pt.matrix,
name = "z-score",
col = colorRamp2(seq(from=-2,to=2,length=11),rev(brewer.pal(11, "Spectral"))),
show_row_names = TRUE,
show_column_names = FALSE,
row_names_gp = gpar(fontsize = 6),
clustering_method_rows = "ward.D2",
clustering_method_columns = "ward.D2",
row_title_rot = 0,
cluster_rows = TRUE,
cluster_row_slices = FALSE,
cluster_columns = FALSE)
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/VSMC_Pseudotime.Heatmap.pdf", height = 4, width = 3)
print(hthc)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
# Examine specific genes within the module(s) of interest (appears to emrich to metabolic genes)
library("viridis")
library(ggplot2)
GENES <- c("AEBP1", "LAMA2", "HDAC9", "ACTA2", "EXOC4", "PDE3A") #Genes selected based on visible trends
p1 <- plot_cells(cds,
genes = GENES[1:2],
label_cell_groups = F,
label_roots = F,
label_branch_points = F,
label_leaves = F,
show_trajectory_graph = F,
min_expr = 1,
alpha = 0.8,
trajectory_graph_color = "grey28",
) +
# geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme(
axis.text = element_text(size = 6), # Adjust the size as needed
axis.title = element_text(size = 8), # Adjust the size as needed
legend.text = element_text(size = 4), # Adjust the size as needed
legend.title = element_text(size = 6),
legend.key.size = unit(2, 'mm')) +
scale_colour_viridis_c(option = "inferno")
p2 <- plot_cells(cds,
genes = GENES[3:4],
label_cell_groups = F,
label_roots = F,
label_branch_points = F,
label_leaves = F,
show_trajectory_graph = F,
min_expr = 1,
alpha = 0.8,
trajectory_graph_color = "grey28",
) +
# geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme(
axis.text = element_text(size = 6), # Adjust the size as needed
axis.title = element_text(size = 8), # Adjust the size as needed
legend.text = element_text(size = 4), # Adjust the size as needed
legend.title = element_text(size = 6),
legend.key.size = unit(2, 'mm')) +
scale_colour_viridis_c(option = "inferno")
p3 <- plot_cells(cds,
genes = GENES[5:6],
label_cell_groups = F,
label_roots = F,
label_branch_points = F,
label_leaves = F,
show_trajectory_graph = F,
min_expr = 1,
alpha = 0.8,
trajectory_graph_color = "grey28",
) +
# geom_point_trace(alpha = .25, stroke = .5, size = 1, color = "black") +
theme(
axis.text = element_text(size = 6), # Adjust the size as needed
axis.title = element_text(size = 8), # Adjust the size as needed
legend.text = element_text(size = 4), # Adjust the size as needed
legend.title = element_text(size = 6),
legend.key.size = unit(2, 'mm')) +
scale_colour_viridis_c(option = "inferno")
pdf(file="../2_Output/Figure_2/UMAP_Pseudotime_Genes.pdf", height = 4, width = 3)
# ggarrange(p1, p2,p3, ncol=1, nrow=3, common.legend = TRUE, legend="right")
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
p1+p2+p3
# Plot genes according to "pseudotime"
lineage_cds <- cds[rowData(cds)$gene_short_name %in% GENES, ] #colData(cds)$cell_type %in% c("VSMC")
lineage_cds<-order_cells(lineage_cds, root_cells = root_cell)
pdf(file="../2_Output/Figure_2/Pseudotime_curves.pdf", height = 7, width = 3)
monocle3::plot_genes_in_pseudotime(lineage_cds,
color_cells_by="ident",
min_expr=0)
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
library(ggpubr)
hdat_vsmc$VSMC_phenotype <- Idents(hdat_vsmc)
Idents(hdat_vsmc) <- "Disease"
de_VSMC <- FindMarkers(hdat_vsmc, ident.1 = "Dissection", ident.2 = "Control", verbose = FALSE, logfc.threshold = 0.25, min.pct = 0.25)
# Create a file of differentially expressed genes between VSMC1 and VSMC2
openxlsx::write.xlsx(de_VSMC, file = "../2_Output/Figure_2/VSMC_DEGs_Disease.xlsx", rowNames=T)
###
library(ggpubr)
plots_Disease_UP <- VlnPlot(hdat_vsmc, features = c("MACROD2", "CDK17", "FOS"), group.by = "Disease",
pt.size = 0) & theme(axis.title.x = element_blank()) & scale_fill_manual(values = c("dodgerblue4", "goldenrod2"))
plots_Disease_DOWN <- VlnPlot(hdat_vsmc, features = c("PTPRQ", "HLA-B", "STAB1"), group.by = "Disease",
pt.size = 0) & theme(axis.title.x = element_blank()) & scale_fill_manual(values = c("dodgerblue4", "goldenrod2"))
# ggarrange(plots_Disease_UP, plots_Disease_DOWN, ncol=1, nrow=2, common.legend = TRUE, legend="right")
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/Dissection_up_Top.Violins.pdf", height = 3, width = 6)
plots_Disease_UP
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/Dissection_down_Top.Violins.pdf", height = 3, width = 6)
plots_Disease_DOWN
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
##################
DoHeatmap(hdat_vsmc, features = rownames(de_VSMC), size = 3, disp.min = -2, disp.max = 2) + scale_fill_gradient2(low = "dodgerblue4", mid = "white", high = "coral2",midpoint = 0)
##################
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/Dot.plot_top5markers.pdf", height = 10, width = 7)
Clustered_DotPlot(seurat_object = hdat_vsmc, features = rownames(de_VSMC), x_lab_rotate=F, k = 10)
## [[1]]
##
## [[2]]
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
#Volcano Plot
# Load packages
library(dplyr)
library(ggplot2)
library(ggrepel)
library(openxlsx)
# Read data from the web
options(ggrepel.max.overlaps = Inf)
results = mutate(de_VSMC, minuslogpvalue = -log(p_val), log2FC=avg_log2FC)
results<-results %>% filter(p_val!=0)
results$gene_name<-rownames(results)
results <- results %>%
mutate(., sig=ifelse(p_val<0.05 & log2FC>.5,
"P < 0.05 and Fold-Change > 0.5",
ifelse(p_val<0.05 & log2FC< 0-0.5,
"P < 0.05 and Fold-Change < -0.5",
"Not Sig")
)
)
results$sig<-factor(results$sig,
levels = c("P < 0.05 and Fold-Change < -0.5",
"Not Sig",
"P < 0.05 and Fold-Change > 0.5")
)
max(results$minuslogpvalue, na.rm = TRUE)
## [1] 707.3396
max(results$log2FC, na.rm = TRUE)
## [1] 1.164184
min(results$log2FC, na.rm = TRUE)
## [1] -0.8923921
p = ggplot(results, aes(log2FC, minuslogpvalue)) +
theme_classic() +
theme(axis.line = element_blank(),
axis.ticks = element_blank()
) +
geom_point(aes(fill=sig, size = minuslogpvalue),
colour="black",
shape=21,
stroke = 0,
alpha = 0.9) +
geom_vline(xintercept=0.5, size=.5, linetype="dashed") +
geom_vline(xintercept=-0.5, size=0.5, linetype="dashed") +
geom_hline(yintercept=0-log(0.05), size=.5, linetype="dashed") +
labs(x=expression(Log[2](Fold-Change)), y=expression(-Log[10](P-value))) +
xlim(min(results$log2FC, na.rm = TRUE),max(results$log2FC, na.rm = TRUE)) +
ylim(-0, max(results$minuslogpvalue, na.rm = TRUE)) + geom_hline(yintercept = 0, size = 1) +
geom_vline(xintercept=0, size=1) +
scale_fill_manual(values=c("dodgerblue4", "darkgray", "goldenrod2")) +
scale_size_continuous(range = c(.1, 3))
p+
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC< -0.5), 20, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC>0.5), 20, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
theme(text = element_text(size=20))
##
pdf(file = paste0("../2_Output/Figure_2/VSMC_Dissection.vs.Control_VolcanoPlot.pdf"), height = 5, width = 5)
p+
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC< -0.5), 20, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
geom_text_repel(data=top_n(filter(results, log2FC>0.5), 20, minuslogpvalue), aes(label=gene_name)) +
theme(text = element_text(size=14), legend.position="none")
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
#
# ##################
# DoHeatmap(hdat_vsmc, features = VSMC_type_DEs, group.by = "VSMC_phenotype",size = 3, disp.min = -2, disp.max = 2) + scale_fill_gradientn(colors = c("dodgerblue4", "white", "coral2"))
##################
pdf(file = "../2_Output/Figure_2/DotPlot_VSMC_1.v.2.pdf", height = 10, width = 5)
Clustered_DotPlot(seurat_object = hdat_vsmc, features = VSMC_type_DEs, group.by = "VSMC_phenotype", x_lab_rotate=F, k = 2)
## [[1]]
##
## [[2]]
dev.off()
## quartz_off_screen
## 2
All packages and setting are acquired using the following command:
sinfo<-devtools::session_info()
sinfo$platform
## setting value
## version R version 4.2.2 (2022-10-31)
## os macOS Big Sur ... 10.16
## system x86_64, darwin17.0
## ui X11
## language (EN)
## collate en_US.UTF-8
## ctype en_US.UTF-8
## tz America/New_York
## date 2023-01-14
## pandoc 2.19.2 @ /Applications/RStudio.app/Contents/Resources/app/quarto/bin/tools/ (via rmarkdown)
sinfo$packages %>% kable(
align="c",
longtable=T,
booktabs=T,
caption="Packages and Required Dependencies") %>%
kable_styling(latex_options=c("striped", "repeat_header", "condensed"))
| package | ondiskversion | loadedversion | path | loadedpath | attached | is_base | date | source | md5ok | library | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| abind | abind | 1.4.5 | 1.4-5 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/abind | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/abind | FALSE | FALSE | 2016-07-21 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| assertthat | assertthat | 0.2.1 | 0.2.1 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/assertthat | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/assertthat | FALSE | FALSE | 2019-03-21 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| bslib | bslib | 0.4.2 | 0.4.2 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/bslib | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/bslib | FALSE | FALSE | 2022-12-16 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| cachem | cachem | 1.0.6 | 1.0.6 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cachem | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cachem | FALSE | FALSE | 2021-08-19 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| callr | callr | 3.7.3 | 3.7.3 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/callr | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/callr | FALSE | FALSE | 2022-11-02 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| cli | cli | 3.5.0 | 3.5.0 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cli | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cli | FALSE | FALSE | 2022-12-20 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| cluster | cluster | 2.1.4 | 2.1.4 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cluster | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cluster | FALSE | FALSE | 2022-08-22 | CRAN (R 4.2.2) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| codetools | codetools | 0.2.18 | 0.2-18 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/codetools | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/codetools | FALSE | FALSE | 2020-11-04 | CRAN (R 4.2.2) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| colorspace | colorspace | 2.0.3 | 2.0-3 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/colorspace | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/colorspace | FALSE | FALSE | 2022-02-21 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| cowplot | cowplot | 1.1.1 | 1.1.1 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cowplot | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/cowplot | FALSE | FALSE | 2020-12-30 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| crayon | crayon | 1.5.2 | 1.5.2 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/crayon | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/crayon | FALSE | FALSE | 2022-09-29 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| data.table | data.table | 1.14.6 | 1.14.6 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/data.table | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/data.table | FALSE | FALSE | 2022-11-16 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| DBI | DBI | 1.1.3 | 1.1.3 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/DBI | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/DBI | FALSE | FALSE | 2022-06-18 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| deldir | deldir | 1.0.6 | 1.0-6 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/deldir | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/deldir | FALSE | FALSE | 2021-10-23 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| devtools | devtools | 2.4.5 | 2.4.5 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/devtools | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/devtools | FALSE | FALSE | 2022-10-11 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| digest | digest | 0.6.31 | 0.6.31 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/digest | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/digest | FALSE | FALSE | 2022-12-11 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| dplyr | dplyr | 1.0.10 | 1.0.10 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/dplyr | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/dplyr | TRUE | FALSE | 2022-09-01 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| ellipsis | ellipsis | 0.3.2 | 0.3.2 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/ellipsis | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/ellipsis | FALSE | FALSE | 2021-04-29 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| evaluate | evaluate | 0.19 | 0.19 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/evaluate | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/evaluate | FALSE | FALSE | 2022-12-13 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| fansi | fansi | 1.0.3 | 1.0.3 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fansi | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fansi | FALSE | FALSE | 2022-03-24 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| farver | farver | 2.1.1 | 2.1.1 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/farver | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/farver | FALSE | FALSE | 2022-07-06 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| fastmap | fastmap | 1.1.0 | 1.1.0 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fastmap | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fastmap | FALSE | FALSE | 2021-01-25 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| fitdistrplus | fitdistrplus | 1.1.8 | 1.1-8 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fitdistrplus | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fitdistrplus | FALSE | FALSE | 2022-03-10 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| fs | fs | 1.5.2 | 1.5.2 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fs | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/fs | FALSE | FALSE | 2021-12-08 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| future | future | 1.30.0 | 1.30.0 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/future | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/future | FALSE | FALSE | 2022-12-16 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| future.apply | future.apply | 1.10.0 | 1.10.0 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/future.apply | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/future.apply | FALSE | FALSE | 2022-11-05 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
| generics | generics | 0.1.3 | 0.1.3 | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/generics | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library/generics | FALSE | FALSE | 2022-07-05 | CRAN (R 4.2.0) | /Library/Frameworks/R.framework/Versions/4.2/Resources/library | |
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